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          ATCC細胞的具體計數操作教學

          發布時間: 2021-06-17  點擊次數: 52次
             當待測ATCC細胞懸液中細胞均勻分布時,通過測定一定體積懸液中的細胞的數目,即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數目。
            具體計數的操作如下:
            1.將計數板及蓋片擦拭干凈,并將蓋片蓋在計數板。
            2.將ATCC細胞懸液吸出少許,滴加在蓋片邊緣,使懸液充滿蓋片和計數板之間,靜置3min,注意蓋片下不要有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中。
            3.計算板四大格細胞總數,壓線細胞只計左側和上方的。然后按公式計算:
            細胞數/mL=四大格細胞總數/4×104。
            說明:公式中除以4,因為計數了4個大格的細胞數。公式中乘以104因為計數板中每一個大格的體積為:
            1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm³,而1ml=1000mm³。
            注意:鏡下偶見有兩個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算,若細胞團10%以上,說明分散不好,需重新制備細胞懸液。
            ATCC細胞計數要點:
            1.進行細胞計數時,要求懸液中細胞數目不低于1×107 L-1,如果細胞數目很少要進行離心再懸浮于少量培養液中。
            2.要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數準確性。
            3.取樣計數前,應充分混勻細胞懸液,尤其時多次取樣計數時更要注意每次取樣都要混勻,以求計數準確。
            4.數細胞的原則是只數完整的細胞,若細胞聚集成團時,只按照1個細胞計算。如果細胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計右線,不計左線。
            5.操作時,注意蓋片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數。

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