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          如何檢測ATCC細胞增殖情況呢?

          發布時間: 2021-06-10  點擊次數: 56次
             直接計數法是簡單的檢測ATCC細胞生長的方法。計數細胞一般利用臺盼藍(臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色。而死亡細胞的細胞膜通透性增高,可使染料進入細胞內而使細胞著色)。因此,鏡下未染色細胞認為是活細胞,而染色細胞認為是死亡細胞。
            檢測DNA合成法是目前檢測ATCC細胞增殖準確可靠的方法,常用的方法有:
            1.3H-胸腺嘧啶核苷滲入法(3H-TdR)
            胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA合成的前體物,處于S期的細胞不斷地攝取TdR用以合成DNA。3H-TdR摻入法是將被放射性標記的3H-TdR摻入DNA合成期的細胞,細胞內3H-TdR摻入量的多少可客觀反映細胞復制DNA能力的大小,從而問接了解細胞增殖情況。通過檢測H放射活性即可反映DNA含量。
            2.BrdU檢測法
            BrdU中文全名為5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)摻入,而后利用抗BrdU的抗體耦聯不同的酶,加入不同發光特性的底物,然后再通過比色法、化學發光檢測或熒光信號檢測底物強度等步驟,反映BrdU的摻入量。該方法不需要再和放射性物質打交道。
            3.EdU檢測法
            BrdU雖然解決了接觸同位素的問題,但該方法需要變性DNA后才能與抗體結合,但這就破壞了DNA雙鏈結構,對某些后續或同時進行的試驗,如其他染料的結合染色有影響?,F在有一種新的檢測方法能避免這種情況的發生-EdU檢測。EdU(5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團在天然化合物中很少見,在細胞增殖時能夠插入正在復制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應可以進行高效快速的細胞增殖檢測分析,可以有效地檢測處于S期的細胞百分數。與傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,更簡單、快速、準確。

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